Phân tích nhóm sterol bằng phương pháp sắc ký lỏng pha đảo siêu cao áp dòng máy LC-4000 Jasco – Nhật Bản

GIỚI THIỆU

Sterol là một nhóm hợp chất hữu cơ thuộc phân lớp steroid, có vai trò sinh học vô cùng quan trọng đối với con người cũng như động vật. Sterol có thể được chia thành hai nguồn như sau: sterol có nguồn gốc từ thực vật (phytosterol) và sterol có nguồn gốc từ động vật (zoosterol). Cholesterol là một loại zoosterol phổ biến cấu tạo nên thành tế bào, là tiền chất tổng hợp các hormone và các vitamin nhóm D… Bên canh đó, các cholesterol xấu cũng ảnh hướng đến sức khỏe con người nếu không được dung nạp đúng cách, Tác động nguy hiểm nhất của cholesterol xấu có thể kể đến là xơ vữa động mạch, từ đó dẫn đến các biến chứng đe dọa tính mạng như nhồi máu cơ tim và đột quỵ Vì vậy, việc phân tích và định lượng sterol rất quan trọng trong sản xuất và kiểm soát chất lượng thực phẩm.

Dưới đây sẽ minh họa phân tích một số mẫu chuẩn của bốn loại phytosterol và cholesterol (Hình 1) bằng cột UHPLC Unifinepak C18 – Jasco với kích thước hạt 1,9 μm. Ngoài ra, một loại mayonnaise chứa phytosterol (I) và một loại mayonnaise thông dụng trên thị trường (II) cũng được tiến hành phân tích song song.

THỰC NGHIỆM

Bảng 1: Điều kiện thực nghiệm định lượng 5 loại sterol

Điều kiện thực nghiệm
Cột	Unifinepak C18 (2.0 mm ID x 150mm, 1.9 μm)
Pha động	A: Acetonitrile/Water (95/5), B: THF
Tốc độ dòng	0.5 mL/phút
Nhiệt độ cột	40 độ C
Đầu dò	Đầu dò UV (Bước sóng: 278 nm)
Thể tích tiêm	1 μL
Chuẩn sử dụng (nồng độ 0.5mg/mL)	Ergosterol Cholesterol Camesterol Stigmasterol β-Sitosterol

Hình 1: Các dạng sterol sử dụng trong thực nghiệm

KẾT QUẢ

Hình 2 là sắc ký đồ của chuẩn hỗn hợp sterol nồng độ 0.5 mg/mL từ dung dịch chuẩn gốc 10mg/mL được pha trong THF để bảo quản, các dung dịch thứ cấp được pha loãng từ chuẩn gốc bằng dung môi acetronil xuống nồng độ 0.5 mg/mL để tiến hành phân tích trong thí nghiệm này.

Hình 2: Sắc ký đồ của các chuẩn sterol ở nồng độ 0.5mg/mL

1. Ergosterol, 2. Cholesterol, 3. Camesterol, 4.Stigmasterol, 5. β-Sitosterol

Như thể hiện trong hình 2, cột UHPLC có độ phân giải cao (2.0 mm ID x 150 mm L, 1.9 μm) tách hoàn toàn campesterol (peak 3) và stigmasterol (peak 4) với độ phân giải cao so với đường nền.

Tiếp theo, mẫu mayonnasie (I) và mẫu thứ hai là loại mayonnaise (II). Hai mẫu này được xử lý sơ bộ theo quy trình được mô ta ở bảng 2. Ở đây, sẽ có sự khác biệt đôi chút trong quy trình xử lý mẫu sơ bộ đối với hai mẫu mayonnasie này.

Bảng 2: Quy trình xử lý mẫu mayonnaise chứa phytosterol (I) và mẫu mayonnaise thông dụng trên thị trường (II)

Quy trình xử lý mẫu mayonnise (I)	Quy trình xử lý mẫu mayonnise (II)
Thêm 10 mL THF vào mẫu có khối lượng cân 1g, lắc trong 5 phút Ly tâm mẫu ở 3000 vòng/phút trong 5 phút Lấy 1mL dịch chiết (lớp trên chứa THF) vào ống ly tâm chứa sẵn 9mL ACN Tiếp tục ly tâm ở 3000 vòng/phút trong 5 phút Lấy lớp dịch chiết (lớp trên) và phân tích bằng phương pháp UHPLC	Thêm 10 mL THF vào mẫu có khối lượng cân 1g, lắc trong 5 phút Ly tâm mẫu ở 3000 vòng/phút trong 5 phút Lấy lớp dịch chiết (lớp trên) và phân tích bằng phương pháp UHPLC

 

Hình 3: Sắc ký đồ của mẫu mayonnaise (I)

2. Cholesterol, 3. Camesterol, 4. Stigmasterol, 5.β-Sitosterol

Có thể thấy, UHPLC có khả năng tách được các sterol khác nhau – phytosterol; campesterol, stigmasterol và β-sitosterol trong mẫu mayonnasie (I) chứa phytosterol được mô tả trong hình 3.

Trong quá trình phân tích, các thành phần tạp cũng sẽ bị lôi kéo theo trong quá trình xử lý mẫu, các thành phần này rất khó loại bỏ trong quá trình xử lý sơ bộ. Vì vậy, cột phải được rửa bằng dung môi THF (dung môi B) giữa các lần đo mẫu.

Trong quá trình xử lý mẫu mayonnaise (II) ,không có bước pha loãng mẫu bằng dung môi acetonitril. Vì vậy, cần lưu ý rằng nồng độ các sterol trong mẫu mayonaise (II) này (hình 6) sẽ cao gấp mười lần so với mẫu mayonnasie (I) (hình 3).

Hình 4: Sắc ký đồ của mẫu mayonnaise (II)

2. Cholesterol,3. Camesterol, 4. Stigmasterol, 5. β-Sitosterol

Hình 4 cho thấy hàm lượng các phytosterol trong mayonnasie (II) khá thấp. Điều này có thể là do dầu thực vật cũng đã được sử dụng trong quá trình sản xuất loại mayonnaise (II) này.

KẾT LUẬN

Những kết quả trên chứng minh rằng phân tích các hợp chất nhóm sterol sử dụng thiết bị UHPLC cột Unifinepak C18 – Jasco là một phương pháp được chúng tôi cải tiếp giúp quy trình phân tích nhanh chóng, chính xác và đáng tin cậy để trong việc kiểm soát chất lượng thực phẩm nói riêng cũng như ngành kiểm nghiệm nói chung.

TỪ KHÓA TÌM KIẾM

410009XRE, Sterol, UHPLC, Phytosterol, Cholesterol, Unifinepak C18 column, UV detector, HPLC